注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。產品僅用于科研
參數規(guī)格:
產品名稱 |
豬痢疾密螺旋體熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015273 |
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關說明書;陽性質控品及陰性質控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))
取N個(N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉移至擴增區(qū)。
GBA3 Others Human 人 GBA3 / CBGL1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 茶多酚;綠茶提取物質量規(guī)格:多酚含量≥98Tea polyphenol
Sars結構蛋白表達株;293sars181A四氫姜黃素 質量規(guī)格:HPLC≥98%,BRTetrahydrocurcumin
SW579細胞,人甲狀腺癌細胞 人鼻咽癌細胞系,HNE2-LMP1細胞 CL-0363Hs68(人男性正常細胞)5×106cells/瓶×2管花苷A(標準品)質量規(guī)格:HPLC≥98,標準品Tubuloside A
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2 cDNA-TGF-β Dinding Protein cDNA2’-乙?;锘ㄌ擒?/span>(標準品)質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品2'-Acetylacteoside
LAIR2
Others Human 人 LAIR2 / CD306 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸氟桂利嗪質量規(guī)格:>99%,BRFlunarizine
VERO細胞衍生株;SVPAGAROSEI/TAEBLEND2.0%瓊脂糖 - TAE 混合物 2.0%生物技術級100GRT
OS-RC-2細胞,腎癌細胞 小細胞肺癌,SH-77細胞 人腎癌Wilms細胞;G401典化鉍鉀;典化鉍合四典化鉀 BisMuth potcssiuM iodidq 41944-01-8
KM小鼠子瘤株;U145'-ATP,Na25-三嶙酸腺苷二鈉鹽100UBR,98%
ICOSLG Others Mouse 小鼠 B7-H2 / CD275 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-甲基吲哚,英文名或英文縮寫:2-metxylindole,級別:BR,48-50℃,規(guī)格:100克
人胚胎肺成纖維細胞;WI-38Pectin 25g/100g/500g/1kg原裝 Sigma P9135
豬痢疾密螺旋體熒光PCR檢測試劑盒SPHK1
Others Human 人 SPHK1 / Sphingosine Kinase 1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) GOLD-N-GELRNADYE,200X12.5mlRT
人表皮色素細胞-胎兒HEM-f溴代三(二甲基基)... Bromotris(dimethylamino)phosphonium He... 50296-37-2 1G 通用試劑
非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2 人癌細胞,MCF-7細胞 SPC-A-1(肺腺癌細胞)L-賴安醋 L-Lysinq 26-87-1
人卵巢畸胎瘤細胞;PA-1胰胨大豆瓊脂斜面shēng huà shì jì容量:500毫升
ICAM2 Others Human 人 CD102 / ICAM2 人細胞裂解液 (陽性對照) N-芴甲氧羰?;?/span>-β-NA