細(xì)胞凍存盒操作示意圖：

細(xì)胞名稱 RAG；小鼠腎腺癌細(xì)胞

形態(tài)特性  變形蟲樣

生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)

特征特性  這是一株腎臟-2α細(xì)胞株的非回復(fù)8-氮雜鳥嘌呤抗性(HPRT-, HGPRT-)克隆。 測(cè)試發(fā)現(xiàn)缺肢畸形病毒(鼠痘)陰性。

培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle＇s Balanced Salts)  胎牛血清，10%

傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。

傳代情況 P(264+5)

凍存條件  完全培養(yǎng)基+8%DMSO

產(chǎn)品僅用于科研處理辦法：

① 脫落的細(xì)胞進(jìn)行離心收集，并在離心管中消化。

② 仍然貼壁的細(xì)胞，按照常規(guī)方法加入胰酶或其他解離劑消化。

③ 再將消化好的脫落細(xì)胞和貼壁細(xì)胞混合，按比例接種到新的培養(yǎng)器皿中。

放入培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)，若4小時(shí)后仍然沒(méi)有伸展，延長(zhǎng)靜置時(shí)間。注意，過(guò)夜靜置時(shí)，需倒出部分培養(yǎng)基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松透氣，保持氣體交換（L15培養(yǎng)體系除外）。

操作步驟

1：從冰箱拿出無(wú)血清非程序凍存液，待用

2：離心收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來(lái)離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）

3：棄上清，加入適量無(wú)血清非程序凍存液，重懸細(xì)胞

4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記

5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存

細(xì)胞凍存液操作示意圖：

細(xì)胞復(fù)蘇步驟：

1：水浴鍋預(yù)熱至37℃?zhèn)溆?

2：準(zhǔn)備15mL離心管，并向其中加入適量培養(yǎng)基待用

3：將細(xì)胞凍存管從-80℃冰箱或液氮中取出，放入PE手套中，迅速投入水浴鍋

4：用力搖晃凍存管，使其在1分鐘內(nèi)融化

5：用紙巾擦拭水漬，轉(zhuǎn)移至生物**柜。用移液槍吸取細(xì)胞懸液，緩慢滴加到步驟2中準(zhǔn)備好的離心管

6：1200rpm離心3分鐘

7：棄上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種至新的無(wú)菌培養(yǎng)器皿中

RAG；小鼠腎腺癌細(xì)胞操作步驟：

1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預(yù)冷

2：離心收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來(lái)離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）

3：用配制好的凍存液重懸細(xì)胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記

4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）

5：凍存管從凍存盒取出，轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存