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細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)操作步驟
日期：2025-01-23 06:08
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摘要：操作步驟：
1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍；
2.消化細(xì)胞：加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中37°C消化（10厘米大皿中加入1ml 0.25%的胰酶，消化4-5min，注意不同細(xì)胞消化時(shí)間不同，終止消化截點(diǎn)為鏡下觀察80%-90%以上的細(xì)胞變圓）；
3.待消化到位后加入胰酶2倍體積的完全培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min；
4.準(zhǔn)備好凍存管，標(biāo)記上日期，細(xì)胞類別，人名，代數(shù)，待細(xì)胞離心后去上清，加入凍存液重懸，每管1-1.5ml,轉(zhuǎn)移到凍存管中；
5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。
注意事項(xiàng)：...
操作步驟：
1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍；
2.消化細(xì)胞：加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中37°C消化（10厘米大皿中加入1ml 0.25%的胰酶，消化4-5min，注意不同細(xì)胞消化時(shí)間不同，終止消化截點(diǎn)為鏡下觀察80%-90%以上的細(xì)胞變圓）；
3.待消化到位后加入胰酶2倍體積的完全培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min；
4.準(zhǔn)備好凍存管，標(biāo)記上日期，細(xì)胞類別，人名，代數(shù)，待細(xì)胞離心后去上清，加入凍存液重懸，每管1-1.5ml,轉(zhuǎn)移到凍存管中；
5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。
注意事項(xiàng)：
1、 細(xì)胞加入凍存液之后立即放入-80度保存，勿常溫放置太久
2、 凍存細(xì)胞儲(chǔ)存在-80度中通常不建議超過半年，液氮中通常不建議超過2年。
1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍；
2.消化細(xì)胞：加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中37°C消化（10厘米大皿中加入1ml 0.25%的胰酶，消化4-5min，注意不同細(xì)胞消化時(shí)間不同，終止消化截點(diǎn)為鏡下觀察80%-90%以上的細(xì)胞變圓）；
3.待消化到位后加入胰酶2倍體積的完全培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min；
4.準(zhǔn)備好凍存管，標(biāo)記上日期，細(xì)胞類別，人名，代數(shù)，待細(xì)胞離心后去上清，加入凍存液重懸，每管1-1.5ml,轉(zhuǎn)移到凍存管中；
5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。
注意事項(xiàng)：
1、 細(xì)胞加入凍存液之后立即放入-80度保存，勿常溫放置太久
2、 凍存細(xì)胞儲(chǔ)存在-80度中通常不建議超過半年，液氮中通常不建議超過2年。